Одной из самых значимых проблем здравоохранения в мире остаются гепатотропные вирусы, способные вызывать как острые, так и хронические заболевания. Самым распространённым гепатотропным вирусом является вирус гепатита В.
Хронический вирусный гепатит В представляет собой диффузно-воспалительное заболевание, связанное с персистенцией (непрерывным и цикличным размножением (репликацией) вируса гепатита В. Одной из форм естественного течения заболевания является скрытый гепатит В.
Рис. 1. Скрытая форма гепатита В определяется наличием ДНК ВГВ в ткани печени при отсутствии HBsAg в периферической крови и крайне низкой вирусной нагрузкой в периферической крови, вплоть до невозможности обнаружения
Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера разработал способ выявления ДНК вируса гепатита B в биологическом материале при низкой вирусной нагрузке на основе двухэтапной ПЦР с детекцией по трём мишеням в режиме реального времени. Указанный способ позволяет выявить ДНК вируса при скрытой форме хронического вирусного гепатита В.
В основе способа лежит полимеразная цепная реакция (ПЦР). Диагностика проводится в два этапа, что позволяет увеличивать чувствительность анализа. При этом в ходе исследования определяют три региона вирусного генома, выявление любых двух из которых подтверждает достоверность обнаружения скрытого гепатита В. В качестве контроля ПЦР выступает внутренний контроль, представляющий собой выявление в анализируемом образце гена хозяина (человека). На втором этапе в исследование вводится контрольный образец, представляющий собой плазмиду, содержащую нуклеотидные последовательности трёх регионов вирусного генома. Способ обеспечивает повышение чувствительности и надежности диагностики.
Разработанный способ позволил выявить распространённость скрытого гепатита В у доноров крови, у беременных женщин, у трудовых мигрантов, у ВИЧ-инфицированных лиц, у пациентов, получающих гемодиализную терапию, и больных с гепатитом неясной этиологии.
Получен патент RU2763173C1 от 28.12.2021 г., приоритетная справка от 27.07.2020 г.
Рис. 2. Представлены кривые флуоресценции, отражающие динамику образования продуктов реакции в ходе второго этапа ПЦР. Обозначена кривая CY5, представляющая собой результат амплификации гена человека HPRT, свидетельствующая об успешности экстракции ДНК и последующей амплификации, а также кривые FAM, HEX, ROX, представляющие собой результат амплификации трех регионов генома ВГВ
